换一批
换一批利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除CBX2基因的A549细胞系
Construction of CBX2 gene knockout stable A549 cell line with CRISPR/Cas9 system
摘要目的:利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除CBX2基因的A549细胞系.方法:设计针对敲除CBX2的short guide RNA(sgRNA),并克隆到载体PX459中.将测序正确的重组质粒转染到A549细胞中,利用嘌呤霉素筛选转染阳性细胞并分离得到5个单克隆细胞系,通过Western blot方法检测构建的细胞系中CBX2蛋白表达情况.结果:成功构建了靶向CBX2的CRISPR/Cas9重组质粒,筛选出的5个单克隆细胞系中CBX2蛋白表达水平均显著下降.结论:成功利用CRISPR/Cas9系统构建了稳定敲除CBX2基因的A549细胞系.
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