换一批
换一批原肌球蛋白的重组表达、鉴定及与免疫球蛋白E结合能力分析
Recombinant expression, identification and immunoglobulin E binding analysis of tropomyosin Pen a 1
摘要目的:在大肠杆菌中重组表达贝类主要过敏原—原肌球蛋白(Pen a 1),并且评估其IgE结合活性.方法:首先基于Pen a 1的已知序列人工合成Pen a 1基因,其次将其与质粒pET-28a连接以构建重组表达质粒pET-28a(+)-Pen a 1,经测序、酶切鉴定后导入表达宿主E.coli BL21 (DE3)细胞中.通过IPTG诱导,重组表达Pen a 1蛋白,镍柱纯化表达产物,并采用SDS-PAGE电泳及质谱技术鉴定所得重组蛋白.最后应用贝类过敏患者采用LICA技术检测该重组蛋白的IgE结合活性.结果:PCR结果表明,目的基因全长为930 bp,与理论预测值一致.SDS-PAGE电泳结果显示,目的蛋白在宿主菌内以可溶性蛋白的形式高效表达,分子量约为36 kD,大小与理论值相符.质谱鉴定结果进一步说明所得的重组蛋白为原肌球蛋白Pen a 1.免疫分析结果表明该蛋白具有较高的IgE结合能力.结论:成功表达、纯化出有良好免疫学活性的重组原肌球蛋白Pen a 1,为进一步研究Pena1在贝类动物如虾类过敏的诊断和治疗中作用奠定基础.
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