换一批
换一批Smarcad1重组蛋白表达及多克隆抗体验证
Expression and polyclonal antibody verification of Smarcad1 recombinant protein
摘要目的:建立稳定的实验室多克隆抗体制备流程,选择Smarcad1作为目的基因进行重组蛋白表达纯化与多克隆抗体制备,并对其进行特异性验证.方法:以本实验室的pcDNA3.1-Flag-Smarcad1质粒作为模板,构建pET-16b-Smarcad1-F1原核表达质粒.表达Smarcad1-F1蛋白,并纯化.利用蛋白质免疫印迹,蛋白质免疫共沉淀和免疫荧光实验检测抗体特异性.结果:PCR鉴定结果显示,成功构建pET-16b-Smarcad1-F1表达质粒.蛋白表达纯化实验中,考马斯亮蓝染色检测,相较于诱导前,加入IPTG后Smarcad1蛋白成功诱导表达,且纯化出分子量为27 kD的目的蛋白.Western印迹证明,制备的抗体能够特异性识别内源性Smarcad1蛋白.蛋白质免疫共沉淀实验显示,相较于对照组,制备的抗体能够与Smarcad1蛋白结合.免疫荧光实验检测所制备抗体的特异性,结果显示制备的抗体可以特异性识别内源性Smarcad1蛋白.结论:成功构建了Smarcad1原核表达质粒,利用原核蛋白表达纯化出Smarcad1蛋白,利用该蛋白制备的抗体可以特异性识别内源性Smarcad1蛋白,为后续原核表达蛋白及多克隆抗体制备提供思路.
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