换一批胎盘生长因子串联scFv质粒构建表达及亲和力测定
Construction,expression and affinity determination of placental growth factor tandem scFv plasmid
摘要目的:构建并表达胎盘生长因子串联scFv,提升对胎盘生长因子的亲和力.方法:设计不同长度的柔性连接子连接的串联scFv,构建串联scFv质粒,并分别将串联scFv与亲本scFv于原核表达系统进行表达.通过间接ELISA分别测定串联scFv及对应亲本scFv亲和力,分别对数据进行单因素ANOVA 方差分析,并使用Dunnett-t检验进行组间比较.结果:柔性连接子长度的不同,会对串联scFv亲和力造成差别.单因素ANOVA方差分析结果表明,各组亲和常数间存在明显的统计学差异,Dunnett-t检验组间比较结果可知,当串联scFv间柔性连接子(GGGGS)n长度n=4和n=5时,亲和力较亲本提升不明显(P＞0.05);但亲和力在n=6(t335=33.90,t7A10-32.00,均P＜0.000 1)及n-7(t335=91.68,t7A10=90.71,均P＜0.000 1)时较两亲本均有明显提升.结论:串联scFv可以明显提高单体scFv亲和力.
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