摘要目的:探究TBX3在BRAFV600E诱导的甲状腺癌细胞失分化中的作用.方法:利用原位自发甲状腺乳头状癌小鼠模型(mPTC)以及诱导型过表达BRAFV600E的体外甲状腺失分化癌模型(Nthy-BRAFV600E Teton),分析TBX3表达水平与甲状腺癌分化基因表达变化的相关性;在体外甲状腺未分化癌(ATC)细胞系KHM-5M以及8505C中敲低TBX3,通过Western印迹、RT-qPCR、Transwell及细胞成球实验,评估其对细胞分化、迁移和干性的影响.结果:免疫组化/免疫荧光实验结果显示,在甲状腺癌进展过程中,Tbx3与分化标志物(Pax8、Tg、Nis)的表达水平呈负相关.在Nthy-BRAFv600ETeton细胞系中加入强力霉素,Western印迹结果显示随着磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的持续性激活,BRAF以及TBX3的表达水平逐渐升高.CCK-8实验结果显示,过表达BRAFV600E后细胞增殖能力明显提升(t=9.076,P＜0.000 1).选取诱导48 h为最佳诱导时间点,此时TBX3表达水平显著升高(t=6.180,P＜0.01),分化基因 TG、PAX8 以及 FOXE1 的 mRNA 水平明显降低(t=4.101、2.994、4.392,均 P＜0.05).RT-qPCR 结果显示,ATC细胞系KHM-5M以及8505C中TBX3的mRNA水平明显高于人正常甲状腺上皮细胞Nthy(q=18.82、6.562,均P＜0.01).当KHM-5M以及8505C中,TBX3的表达量明显降低(敲低组vs.对照组,KHM-5M中q=82.29、61.22,均P＜0.000 1;8505C中 q=25.89、26.71,均 P＜0.001)时,Western 印迹结果显示 NIS(q=35.50、9.343,均 P＜0.01;q=19.02、20.55,均 P＜0.001)、PAX8(q=27.72、17.16,均 P＜0.001;q=6.831、7.015,均 P＜0.05)、TPO(q=27.14、6.113,均P＜0.05;q=56.34、10.81,均 P＜0.01)、TTF-1(q=16.69、4.576,均P＜0.05;q=25.69、22.70,均P＜0.001)的表达水平显著上调.Transwell迁移实验表明,敲低TBX3显著抑制了KHM-5M 以及 8505C 的迁移能力(敲低组vs.对照组,KHM-5M 中 q=10.90、11.67,均 P＜0.000 1;8505C 中 q=14.49、35.19,均 P＜0.000 1).此外,细胞成球实验结果显示,敲低TBX3后,KHM-5M以及8505C的成球能力明显降低(敲低组vs.对照组,KHM-5M中q=8.660、12.56,均P＜0.001;8505C中q=10.41、14.79,均P＜0.000 1).结论:TBX3通过抑制甲状腺癌细胞分化、增强迁移能力以及维持干细胞特性,介导了 BRAFV600E诱导的甲状腺癌失分化,从而促进肿瘤的恶性进展.