UCH-L3通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化

UCH-L3 regulating the proliferation and differentiation of bovine skeletal muscle satellite cells by influencing RAD51

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摘要本研究旨在探究泛素蛋白酶体系统中羧基末端水解酶L3(Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L3,UCH-L3)通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的机制.使用已经建立的牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,体外模拟骨骼肌的发育过程,采用免疫沉淀技术检测UCH-L3与RAD51是否相互作用,检测UCH-L3是否调控RAD51的泛素化水平,设计并合成RAD51的si-RNA,转染牛骨骼肌卫星细胞,筛选出有显著干扰效果的si-RNA,研究干扰RAD51后增殖和分化标志基因PAX7和MyHC表达水平变化,综合分析UCH-L3通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的机制.结果表明:过表达UCH-L3后RAD51的蛋白水平显著升高,UCH-L3可以调控RAD51的表达水平.UCH-L3与RAD51存在体内相互作用,UCH-L3可以影响RAD51的蛋白稳定性,干扰UCH-L3表达可以缩短RAD51的半衰期,UCH-L3能够调控RAD51泛素化水平,干扰RAD51后,牛骨骼肌卫星细胞增殖标志因子PAX7的蛋白水平与对照组无差异,分化标志因子MyHC的蛋白水平显著低于对照组(P＜0.05),干扰RAD51表达对细胞增殖没有明显影响,但可以抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化.本研究结果表明,UCH-L3可以通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化进程.