谷胱甘肽亲和层析介质的制备条件及其层析特性研究
The Preparation of GSH Affinity Chromatographic Adsorbent and the Research of its Chromatographic Characteristics
摘要以琼脂糖凝胶4FF(Sepharose 4 Fast Flow)为基质,1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDGE)为活化剂,通过活化、偶联谷胱甘肽(GSH),得到 GSH 亲和层析介质.实验结果表明:活化及偶联的优化条件为10,mL 基质加入0.42,g NaOH、15,mL 二甲基亚砜(DMSO)、15,mL BDGE,反应温度为40,℃,反应时间为6,h;偶联溶液 pH 6.5,反应温度为37,℃,反应时间为24,h .在此条件下,环氧基修饰密度可达60~65,μmol/mL;所制备的介质载量为(14.19±0.98)mg/mL.以此介质对谷胱甘肽 S–转移酶(GST)、融合蛋白 GST-Bcl-2、GST-Ald、GST-PTPN12进行纯化,结果表明,该介质纯化效果较好、载量高、稳定性能较好,可重复使用.
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