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鞘氨醇激酶1修饰的脂肪来源间充质干细胞对组织工程化骨成骨效果的影响

Impact of SPK1 Modified ADSC on Osteogenesis of Tissue Engineered Bone

摘要目的 研究鞘氨醇激酶1 (sphingosine kinase 1,SPK1)修饰的脂肪来源间充质干细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSC)对组织工程化骨成骨能力的影响.方法 将从SD大鼠脂肪细胞中分离提取的ADSC分为对照组(CON组)与实验组(SPK1组),分别感染10 MOI的CON和SPK1慢病毒,在感染病毒14 d后,分别使用茜素红和油红O染色,检测A595nm和A490nm以判定成骨、成脂能力,检测两组成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性变化.构建SD大鼠股骨缺损模型,在CON与SPK1两组ADSC与β磷酸三钙陶瓷(β-TCP)结合后,将组织工程骨填压至缺损处,4、6周后X线检测大鼠骨缺损修复情况,Western blot检测SPK1、骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein,BMP7)表达变化.结果 流式细胞仪检测CON和SPK1慢病毒感染效率分别为94.4%、94.9%;CON和SPK1组SPK1蛋白相对表达量分别为(0.73±0.10) vs.(1.29±0.17),P<0.05;CON和SPK1组A595nm分别为(0.20±0.02)vs.(0.41±0.01),A490nm分别为(0.72±0.01) vs.(0.51±0.02),均P<0.05.CON与SPK1的ALP活性分别为(1.42±0.09) vs.(2.68±0.09),P<0.01.在骨缺损修复中,第4周SPK1组大鼠骨缺损处形成的高密度组织面积显著大于CON组,在第6周时SPK1组大鼠骨缺损治愈,而CON组则尚有缺损.CON和SPK1组在感染病毒48 h后BMP7相对表达量分别为(1.13±0.16) vs.(4.46±0.23),P<0.05.结论 SPK1修饰的ADSC体外、体内成骨能力增强,其机制可能与BMP7激活相关.

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