换一批
换一批重组人可溶性Tim-3原核表达载体的构建及其重组蛋白的优化表达
Construction and Optimized Expression of Recombinant Human sTim-3-EGFP Fusion Protein
摘要目的 构建人可溶性Tim-3(sTim-3)的重组质粒表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,在大肠埃希菌中进行诱导表达并对其表达条件进行优化.方法 取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增Tim-3基因胞外段序列,克隆入已构建的表达载体pET28a-EGFP中,鉴定阳性克隆.重组质粒转化BL21 (DE3),通过调整IPTG浓度、诱导时机、诱导温度与诱导时间优化蛋白表达条件.结果 成功构建原核表达载体pET28a-sTim-3-EGFP,并转化BL21 (DE3)进行诱导表达.温度和IPTG浓度对蛋白表达量影响不大;在培养至A600nm值约为0.6～0.8时于25℃诱导5h可获得较高的蛋白表达.结论 成功表达可溶性重组蛋白sTim-3-EGFP,为该蛋白的进一步纯化生产及应用奠定了良好基础.
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关键词
Tim-3原核表达增强绿色荧光蛋白融合蛋白T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3prokaryotic expressionenhanced green fluorescent proteinfusion protein
分类号
R
栏目名称
DOI
10.3870/j.issn.1672-0741.2017.03.007
发布时间
2017-08-30
基金项目
国家自然科学基金资助项目（81260007）；
广西卫生厅课题资助项目（Z2012316）
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