线粒体裂变因子对OGD/R诱导的PC12细胞线粒体凋亡通路的影响
Effect of Mitochondrial Fission Factor on Mitochondrial Apoptosis Pathway in OGD/R-stimulated PC12 Cells
摘要目的 探究线粒体裂变因子(mitochondrial fission factor,MFF)在氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)处理的PC12细胞中的表达及其对线粒体凋亡通路的影响.方法 选用PC12细胞系构建体外缺血性神经元损伤模型.利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)实验明确MFF mRNA和蛋白在不同处理时间点的表达情况.通过RNA干扰技术沉默MFF基因表达,利用qRT-PCR、Western blot检测MFF mRNA和蛋白的表达情况;CCK-8检测沉默MFF对OGD/R处理的PC12细胞活力的影响;JC-1和试剂盒检测线粒体膜电位、腺昔三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化;Western blot检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)、Bax和Bcl2的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测Caspase-3和Caspase-9的活性变化.结果 MFF在体外O GD/R诱导的PC12细胞中的mRNA和蛋白含量明显升高.MFF沉默增强了 O GD/R损伤后PC12细胞的活力,降低了细胞凋亡率,并促进Bcl2和抑制Bax蛋白的表达.敲低MFF明显提高了 OGD/R处理后PC12细胞的线粒体膜电位,促进ATP合成,降低ROS含量,抑制线粒体细胞色素C释放和Caspase-3和Caspase-9的活性.结论 沉默MFF基因显著提高了 OGD/R处理后PC12细胞的存活率,改善了线粒体功能.
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