miR-29b通过KLF4调控血管平滑肌细胞增殖及表型蛋白表达
miR-29b Regulates Vascular Smooth Muscle Cells Proliferation and Contractile Markers by Targeting KLF4
摘要目的 探讨微小 RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)通过靶向作用于 Krüppel 样因子 4(Krüppel-like factor 4,KLF4)信号通路对血管平滑肌细胞增殖及表型蛋白表达的影响.方法 将血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分为4组:无义序列对照组(control+NC)、miR-29b过表达对照组(control+miR-29b)、无义序列模型组(ox-LDL+NC)、miR-29b过表达模型组(ox-LDL+miR-29b).对照组细胞正常培养;模型组细胞采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导 24 h 建立模型.细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测VSMCs的增殖情况;实时荧光定量PCR检测miR-29b、单核细胞化学趋化因子1(monocyte chemoattractant pro-tein-1,MCP-1)、MCP-3、α平滑肌肌动蛋白(smooth muscle α-actin,SM α-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM MHC)及 KLF4 的 mRNA 表达水平;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测培养上清中MCP-1、MCP-3水平;Western blot检测蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-29b对KLF4的靶向作用.结果 ox-LDL刺激VSMCs后,细胞中miR-29b表达量显著下降.与ox-LDL+NC组相比,ox-LDL+miR-29b组细胞增殖减少,炎症因子MCP-1和MCP-3的表达降低,收缩表型蛋白SM α-actin、SM MHC的表达显著升高,KLF4表达下降.双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-29b能与KLF4 mRNA的3'端非翻译区(3'UTR)结合.过表达KLF4可抑制miR-29b的作用.结论 miR-29b可靶向作用于KLF4,调控ox-LDL诱导的VSMCs增殖、炎症因子的表达及表型蛋白表达的变化.
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