换一批TRiC/CCT复合体对mTORC1完整性及其活性的调控作用研究
Study on Regulation of mTORC1 Integrity and Activity by TRiC/CCT Complex
摘要目的 探讨 TRiC/CCT 复合体(TCP-1 ring complex/chaperonin containing TCP-1)与 mTOR 复合体1(mTORC1)之间可能的相互调控机制.方法 采用免疫共沉淀技术和Western blot技术探究TRiC/CCT复合体与mTORC1之间的相互作用;使用雷帕霉素抑制mTORC1活性后,制备可溶性及不溶性细胞蛋白样本,比较受CCT辅助折叠的蛋白表达水平变化;通过非变性凝胶电泳技术观察TRiC/CCT复合体的变化,探究mTORC1对TRiC/CCT复合体完整性的影响;利用慢病毒介导的shRNA静默HEK-293T细胞中的CCT2或CCT5基因,研究TRiC/CCT复合体对mTORC1关键组分表达及下游底物磷酸化水平的影响.结果 免疫共沉淀实验证实TRiC/CCT复合体各亚基与mTORC1均存在相互作用;雷帕霉素抑制mTORC1活性后,β-actin、β-Tubulin及STAT3不溶性蛋白表达量无明显增加,且在非变性电泳凝胶中复合体分子大小无明显改变,证明mTORC1对TRiC/CCT复合体的形成不存在调控作用;在HEK-293T中静默CCT2或CCT5后,mTOR、Raptor、mLST8蛋白表达水平降低,且磷酸化的p70S6K及Akt水平降低,证实TRiC/CCT复合体对mTORC1及下游分子具有调控作用.结论 TRiC/CCT复合体通过调控mTORC1各组分的蛋白表达水平,进而影响其下游底物的磷酸化水平及活性状态.
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DOI
10.3870/j.issn.1672-0741.24.05.031
发布时间
2025-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.81571546）
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