RNAi靶向沉默CDX2基因对白血病细胞生物学行为的影响及其作用机制
Effects of RNAi targeting CDX2 gene expression on biological characters of human leukemia cells and its relevant mechanisms
摘要目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默CDX2基因后对白血病细胞K562增殖、凋亡的影响,并检测BCR-ABL及相关凋亡蛋白表达量的变化,探讨其可能的作用机制。方法根据前期实验结果,成功筛选出能够特异性有效靶向沉默CDX2基因的siRNA序列(CDX2-siRNA)和相应的阴性对照序列(CDX2-siRNA-NC),应用罗氏X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染K562细胞,流式细胞术检测CDX2沉默表达后对K562细胞凋亡的影响;RT-PCR法和Western Blot法分别检测BCR-ABL、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达量变化。结果 MTT及流式细胞术检测显示,CDX2沉默表达后,K562细胞增殖能力减弱,凋亡率明显增加;RT-PCR和Western Blot显示,与正常细胞组和CDX2-siRNA-NC组相比,CDX2沉默表达后,CDX2-siRNA组的BCR-ABL mRNA和蛋白表达量明显降低,Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达量明显升高(均P<0.05)。结论 CDX2-siRNA能够明显促进白血病细胞K562凋亡,其机制可能与其抑制BCR-ABL表达,增强Caspase-9、Bax的活性有关。
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