人源性TRAb Fab段单克隆抗体的筛选和鉴定

Selection and identification of human monoantibody TRAb Fab fragment

二维码有效期 120s

摘要目的通过噬菌体表面展示技术,运用已构建的人源性噬菌体抗体库,筛选、表达人源性促甲状腺激素受体抗体(TRAb)Fab段.方法以人TSHR膜外区的氨基端(hTSHRn)、人TSHR膜外区的羧基端(hTSHRc)的融合蛋白为抗原,通过数轮"吸附-洗脱-扩增"富集噬菌体抗体,筛选阳性克隆.从已构建的抗体库中筛选到甲状腺刺激性抗体(TSAb)Fab、甲状腺阻断性抗体(TBAb)Fab,噬菌体(Phage)-ELISA检测选取阳性克隆,PCR及双酶切鉴定TRAb阳性克隆.检测可溶性TRAbFab片段阳性克隆的表达,Western blotting鉴定TRAb阳性克隆的免疫学活性,对TRAbFab阳性克隆进行测序分析.结果经过5轮富集筛选,成功筛选到特异性TRAb(TSAb、TBAb)Fab噬菌体抗体,产率分别提高约77、94倍.通过Phage-ELISA检测,鉴定出了具有抗原结合活性的单克隆抗体,实现可溶性表达.Western blotting证实其免疫学活性.测序分析单克隆48的轻链可变区与人的免疫球蛋白轻链Vλ同源性达到94.4%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH4同源性为88.9%.克隆56的轻链可变区与人的免疫球蛋白轻链Vλ同源性达到95.6%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH3同源性为84.6%.结论本研究通过成功筛选获得人源性TRAb(TSAb、TBAb)Fab片段的单克隆抗体.