动态压力对大鼠干骺端软骨细胞Sox9 mRNA及蛋白表达水平的影响

The effects of dynamic pressure on expression of Sox9 mRNA and protein in metaphyseal chondrocytes of rats

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摘要目的研究动态压力刺激对体外培养的大鼠干骺端软骨细胞Sox9 mRNA及蛋白表达水平的影响,探讨动态压力信号转导的可能机制.方法体外分离培养的大鼠干骺端软骨细胞培养至第3代时随机分为4组:对照组,所有干预措施均不施加;单纯动态压力组,采用开放式压力控制培养系统施加大小为90 mmHg、频率为0.1 Hz的动态压力刺激;单纯钙离子拮抗剂组,施加浓度为10μmol/L硝苯地平干预;动态压力+钙离子拮抗剂组,同时进行90 mmHg、0.1 Hz的动态压力刺激和浓度为10μmol/L硝苯地平干预.干预24 h后进行实时定量PCR检测各组细胞Sox9 mRNA表达情况,Western blot检测各组细胞Sox9蛋白表达情况.以Fluo-3/AM标记干骺端软骨细胞内游离Ca2+,激光共聚焦扫描显微镜扫描并比较各组细胞平均荧光强度.结果实时定量PCR结果显示,单纯动态压力组细胞内Sox9 mRNA平均表达水平是对照组细胞的3.81倍,蛋白表达水平是对照组细胞的2.33倍(P<0.05);单纯钙离子拮抗剂组细胞Sox9 mRNA表达量和蛋白表达量与对照组差异无统计学意义;动态压力+钙离子拮抗剂组细胞Sox9 mRNA表达量和蛋白表达量均较单纯动态压力组低,但均较对照组升高(P<0.05).各组细胞平均荧光强度结果表明各组细胞内游离Ca2+浓度差异无统计学意义(P>0.05).结论动态压力刺激可以增加大鼠干骺端软骨细胞Sox9 mRNA及蛋白的表达,且在该力学信号转导中有钙离子通道的参与.