换一批人参皂苷Rg3通过抑制mTOR通路介导的磷酸戊糖途径对肺癌细胞的放射增敏作用
The radiosensitizing effect of ginsenoside Rg3 on lung cancer cells by inhibiting mTOR pathway-mediated pentose phosphate pathway
摘要目的 探讨人参皂苷Rg3通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路介导的磷酸戊糖途径(PPP),对肺癌细胞放射敏感性的影响.方法 以0、10、20、40、60、80 mg/L的人参皂苷Rg3处理肺癌细胞A549;MTT法检测细胞增殖情况;将细胞分为对照组(正常培养,不照射)、放射组(X射线照射处理)、人参皂苷Rg3组(60 mg/L人参皂苷Rg3,不照射)、联合组(X射线照射+60 mg/L人参皂苷Rg3)、激活剂组(X射线照射+60 mg/L人参皂苷Rg3+100 nmol/L mTOR通路激活剂MHY1485);均为加入相对应药物培养48h后放射组、联合组和激活剂组采用8GyX射线照射.平板克隆实验检测各组细胞克隆形成率;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;γ-H2AX免疫荧光染色分析DNA损伤修复情况;Western blot检测细胞中mTOR、p-mTOR、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、γ-H2AX蛋白的表达.结果 人参皂苷Rg3以剂量依赖性的方式抑制A549细胞的增殖(P＜0.05);与对照组比较,放射组、人参皂苷Rg3组细胞克隆形成率、G6PD、ROS、NADPH水平下降,p-mTOR/mTOR、PCNA蛋白表达水平降低,细胞凋亡率、γ-H2AX焦点数、Bax、caspase-3、γ-H2AX蛋白表达水平升高(P＜0.05);与放射组、人参皂苷Rg3组比较,联合组细胞克隆形成率、G6PD、ROS、NADPH水平下降,p-mTOR/mTOR、PCNA蛋白表达水平降低,细胞凋亡率、γ-H2AX焦点数、Bax、caspase-3、γ-H2AX蛋白表达升高(P＜0.05);与联合组比较,激活剂组细胞克隆形成率、G6PD、ROS、NADPH水平升高,p-mTOR/mTOR、PCNA蛋白表达水平升高,细胞凋亡率、γ-H2AX焦点数、Bax、caspase-3、γ-H2AX蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg3发挥抑制肺癌作用可能是通过抑制mTOR介导的PPP实现的.
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