摘要[目的]研究旨在探讨骨碎补总黄酮通过调控大鼠生长板软骨细胞微小RNA 125b-2-3p(miR-125b-2-3p)表达对Ⅱ型胶原基因(COL2A1)和印度刺猬蛋白-甲状旁腺激素相关蛋白(Ihh-PTHrP)信号通路的调节作用及对细胞增殖的促进效果.[方法]选取2周龄的SD大鼠胫骨近端生长板软骨细胞进行体外培养并完成细胞鉴定.采用不同浓度的骨碎补总黄酮对细胞进行处理,通过噻唑蓝染色(MTT)实验筛选出最能促进细胞生长的药物浓度.利用实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术筛选出能够抑制甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)表达的质粒.在后续实验中,设置多个实验组,包括空白对照组、骨碎补总黄酮组、Ihh-PTHrP通路激活组、PTHrP抑制剂组、骨碎补总黄酮+PTHrP组以及骨碎补总黄酮+PTHrP抑制剂组.通过MTT法评估骨碎补总黄酮和PTHrP对细胞增殖的影响,并通过酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞中COL2A1的表达水平.进一步利用生物信息学方法筛选可能调控COL2A1表达的微小核糖核酸(miRNAs),提取细胞培养上清液中的总RNA,并通过RT-qPCR分析筛选出的miR-NAs在不同实验组中的表达差异.通过双荧光素酶报告基因实验验证miRNA对COL2A1表达的调控作用.最后,通过miRNA抑制剂和模拟物对COL2A1表达的影响,证实骨碎补总黄酮通过miRNA调控促进COL2A1的表达和细胞增殖.[结果]发现250 mg/L的骨碎补总黄酮在促进细胞增殖方面效果最佳,骨碎补总黄酮组和骨碎补总黄酮+PTHrP组均能显著促进细胞增殖,而PTHrP抑制剂则抑制了细胞增殖.双荧光素酶报告基因实验确认miR-125b-2-3p能够调控COL2A1的表达,且在空白对照组和骨碎补总黄酮组中miR-125b-2-3p表达存在显著差异.进一步实验表明,骨碎补总黄酮和miR-125b-2-3p抑制剂均能提高COL2A1的表达,而miR-125b-2-3p模拟物则降低其表达.[结论]骨碎补总黄酮通过降低miR-125b-2-3p的表达,增强Ihh-PTHrP通路中COL2A1的蛋白表达,从而促进生长板软骨细胞的增殖,对治疗与生长板软骨细胞增殖相关的疾病具有潜在的应用价值.