鸦胆子醇提物抗三阴性乳腺癌机制研究
Study on the anti-triple-negative breast cancer mechanism of Brucea javanica ethanol extract
摘要[目的]探究鸦胆子醇提物对于三阴性乳腺癌(TNBC)的治疗作用,验证其可能的作用机制.[方法]通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测鸦胆子醇提物24h抑制TNBC细胞增殖的能力;克隆形成实验检测鸦胆子醇提物长期对TNBC细胞增殖的影响;倒置显微镜观察鸦胆子醇提物处理后细胞形态变化;基于4T1荷瘤小鼠模型评价鸦胆子醇提物对TNBC的体内药效;对4T1荷瘤小鼠肿瘤组织进行转录组学测序分析,探究鸦胆子醇提物在TNBC治疗领域的潜在机制;利用流式细胞术检测鸦胆子醇提物对TNBC细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证凋亡相关基因与蛋白变化.[结果]CCK-8结果显示,与对照组相比,鸦胆子醇提物显著抑制了4T1细胞和MDA-MB-231细胞活力(P<0.05或P<0.01),且具有剂量依赖性;克隆形成实验表明鸦胆子醇提物可以抑制4T1细胞和MDA-MB-231细胞的长期增殖(P<0.01);鸦胆子处理后的细胞形态发生明显变化;在体内,鸦胆子醇提物同样可以抑制TNBC肿瘤生长;转录组测序提示鸦胆子醇提物抗TNBC的作用机制可能是诱导凋亡,流式细胞术结果证实鸦胆子醇提物可以诱导TNBC细胞凋亡,RT-qPCR检测到凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)上调,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)下调(P<0.05);Western blot结果显示促凋亡蛋白Bax和核转录因子-κB(NF-κB)表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.05).[结论]鸦胆子醇提物可以通过诱导凋亡抑制TNBC.
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