PAX3对靶基因MITF转录活性调控的实验研究

Experimental Studies on Regulation of PAX3 on Transcriptional Activities of Target Gene MITF

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摘要目的：探讨配对盒基因（pair box 3，PAX3）突变对小眼球畸形相关转录因子（microphthalmia－asso‐ciated transcription factor ，MITF）基因转录活性的影响及其在I型Waardenburg综合征（Waardenburg syndrome ， WS）发病中的作用。方法野生型PAX3及其致病突变H80D和H186fsX5表达质粒瞬时转染293T细胞，应用荧光素酶活性检测系统对M IT F报告基因活性检测，观察野生／突变 PAX3蛋白对其靶基因M IT F转录活性的调控作用及二个突变蛋白对野生PAX3蛋白功能的影响；应用生物素标记的含序列attaat的DNA寡核苷酸链探针分别沉淀PAX3、H80D和H186fsX5蛋白，检测野生／突变PAX3蛋白与靶基因MITF启动子的结合力。结果尽管H80D蛋白仍残余部分功能可增加M IT F启动子转录活性，但与野生PAX3蛋白相比，二者差异有显著统计学意义（P＜0．01），而 H186fsX5蛋白则完全失去调控MITF启动子转录活性作用（P＜0．01）；二者均未对野生PAX3蛋白功能产生显性负效应作用（P＞0．05）。突变 H80D蛋白与野生 PAX3蛋白均可与MITF启动子特异DNA序列attaat结合，而突变H186fsX5蛋白则不能与之结合。结论 H80D和H186fsX5影响靶基因M IT F转录活性，使其表达下调、黑色素合成减少，以单倍体剂量不足效应致I型WS。