换一批显性致聋突变GJB2 p.D179N影响缝隙连接蛋白26寡聚平衡状态
The dominant deafness point mutation GJB2 p.D179N affects the oligomeric equilibrium of connexin 26
摘要目的 探究缝隙连接蛋白β2(GJB2)基因显性致聋点突变p.D179N对缝隙连接蛋白26(Cx26)寡聚平衡状态的影响.方法 通过在HEK293F细胞表达Cx26野生型(Cx26-WT-GFP)及突变体融合蛋白(Cx26-D179N-GFP,Cx26-D179C-GFP);通过荧光尺寸排阻色谱法(fluorescence-detection size-exclusion chromatography,FSEC)及尺寸排阻色谱法(size-exclusion chromatography,SEC)分别在溶膜纯化条件下根据分子量分析目的蛋白的寡聚状态;通过冷冻电镜(cryo-electron microscopy,Cryo-EM)单颗粒分析(single particle analysis,SPA)根据目的蛋白颗粒2D分类形态结果来分析目的蛋白的寡聚状态.结果 在离体条件下,野生型Cx26蛋白(Cx26-WT)几乎均为十二聚体,Cx26致聋点突变p.D179N蛋白(Cx26-D179N)同时存在十二聚体及六聚体,Cx26人为改造点突变p.D179C蛋白(Cx26-D179C)不存在十二聚体.结论 显性致聋突变GJB2 p.D179N可减弱其六聚体蛋白间的对接能力,影响其六聚体、十二聚体之间的平衡状态.
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关键词
致聋突变缝隙连接蛋白26蛋白纯化尺寸排阻色谱法冷冻电镜单颗粒分析Deafness mutationConnexin 26Protein purificationSize-exclusion chromatographyCryo-electron microscopy single-particle analysis
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-7299.2025.03.011
发布时间
2025-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室专项基金（14DZ2260300）
黄浦区产业扶持基金（XK2019011）
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