摘要目的 采用 CRISPR/Cas9 联合 Cre-LoxP 方法构建 DEAD-box RNA 解旋酶 3X 连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked,Ddx3x)肝脏条件性敲除小鼠.方法 设计特异的 sgRNA序列,在 Ddx3x基因外显子 4～10 两端插入 LoxP 序列,构建 Ddx3x-flox小鼠.采用 PCR方法对 F0 代和 F1 代小鼠进行基因鉴定.将 Ddx3x-flox F1 代小鼠与特异性表达 Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏条件性敲除 Ddx3x基因小鼠(Ddx3xΔhep).采用 PCR方法和 Western blotting 方法分别检测 Ddx3xΔhep 基因小鼠目的基因与蛋白的表达.选取 8 周龄雄性野生型 C57/6J小鼠、Ddx3xΔhep 小鼠、Ddx3xfl/fl 小鼠,测定血清 ALT、AST 水平评价肝脏肝损伤情况.结果 对F1 代小鼠基因 PCR鉴定的结果表明,基因型符合 Ddx3xfl/fl;F1 代小鼠与 Alb-Cre 小鼠杂交,子代与 Ddx3xfl/fl 小鼠杂交,即获得Ddx3xΔhep 小鼠;PCR与 Western blotting结果显示,目的小鼠肝组织中 Ddx3x基因和蛋白表达显著降低.此外,Ddx3xΔhep 小鼠无胚胎致死现象,出生后生理状况良好.正常饲养条件下,Ddx3xΔhep 小鼠与 Ddx3xfl/fl 小鼠及野生型小鼠相比,血清 ALT、AST 指标及体质量差异均无统计学意义(P>0.05).结论 基于 CRISPR/Cas9 联合 Cre-LoxP 方法成功构建了 Ddx3xΔhep 小鼠动物模型,为后续研究Ddx3x在肝脏中的生物学功能及作用机制奠定了良好的基础.