换一批肝癌组织特异性Pafp IRES2-EGFP表达载体的构建及表达
Construction of Murine Hepatoma Specific PafpIRES2-EGFP Vector and Its Expression in H22 Cells
摘要目的 构建AFP最小启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体,观察其在小鼠H22肝癌细胞中的特异性表达.方法 从H22细胞总DNA和荧光载体pIRES2-EGFP中分别PCR扩增AFP最小启动子区序列和CMV增强子(ECMV),利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得AFP启动子驱动的嵌合调控序列,将其克隆入pIRES2-EGFP载体,进行菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定.通过jetPEI方法转染H22肝癌细胞和YAC1淋巴瘤细胞,荧光显微镜下观察其表达的组织特异性.结果 从小鼠H22细胞DNA和pIRES2-EGFP中分别扩增得到229bp和324bp的片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到-537bp的条带,均与预期序列长度一致.SOE产物与pIRES2-EGFP连接,菌落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经Nde I+Nhe I限制性酶谱分析酶解出537bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的嵌合DNA与GeneBank中小鼠AFP启动子和ECMV序列完全一致.结论 本研究成功构建了AFP启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达外源基因.
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分类号
R392.12（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-3101.2008.03.003
发布时间
2008-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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