水稻单倍体不定芽超低温保存和植株再生及其遗传稳定性研究
REGENERATING PLANTS FROM CRYOPRESERVATED ADVENTITIOUS BUDS OF HAPLOIDS AND THEIR GENETIC STABILITY IN RICE
摘要通过水稻单倍体幼穗离体培养,诱导形成了大量的不定芽.将3 mm左右的不定芽转入半固体继代培养基继代培养7 d,而后转入1.8 mL的安瓿瓶中,冰浴条件下加入预冻了的冰冻保护剂淹没材料,在冰上平衡45~60 min后,转入程序降温仪,以1.0℃/min的速率从4℃降至-40℃,在-40℃停留1 h后,投入液氮保存.将液氮保存30 d左右的不定芽于38~40℃的水浴中快速解冻,随即转入半固体的再生培养基,以待恢复生长并再生植株.结果显示:经继代培养的不定芽超低温保存后的成活率为21%~29%,再生出苗率为14%~18%,而未经继代培养的不定芽超低温保存后的成活率仅为8%,且均不能再生成苗.继代培养基MS+蔗糖3%+山梨醇4%或马铃薯提取液20%均具有良好的继代培养效果,有效的冰冻保护剂为10% DMSO+0.5 mol/L山梨醇.对不定芽经液氮超低温保存的再生植株进行染色体镜检及RAPD分析,结果表明再生植株在染色体倍性及DNA水平上仍具有较好的遗传稳定性.
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