换一批
换一批短命植物东方旱麦草Rubisco大亚基基因(rbcL)的克隆及表达分析
Cloning and Expression of rbcL Gene of Rubisco Large Subunit from Ephemeral Plant Eremopyrum orientale L.
摘要利用PCR、DNA重组、原核与真核生物表达等技术从新疆短命植物东方旱麦草(Eremopyrum orientale)基因组中扩增出Rubisco大亚基基因rbcL(GenBank登录号为FJ346562),并构建了原核与真核表达载体pGEX4T-1-rbcL和pcDNA3-rbcL,随后分别在原核宿主BL21(DE3) 和小鼠中进行了表达,并利用真核表达载体和纯化蛋白制备的抗体,对表达产物的特异性进行了Western 印迹检测.结果表明:东方旱麦草的rbcL基因可读区包含1431 bp,与旱麦草rbcL基因的同源性达99.86%,推测编码476个氨基酸,分子量56 kD.该基因在BL21中以融合蛋白GST-RBCL形式表达并存在于包含体中,融合蛋白大小约为82 kD.RT-PCR检测到该基因在小鼠肝脏中的表达.利用真核表达载体与纯化融合蛋白进行联合免疫制备的RBCL抗体可与RBCL特异性地结合,这为短命植物东方旱麦草基因后续的免疫定位检测奠定了基础.
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分类号
Q786Q949.71~+4.2
栏目名称
研究论文
DOI
10.3969/j.issn.2095-0837.2009.05.001
发布时间
2009-12-22
基金项目
国家教育部留学回国人员启动基金(2006～2008)
教育部科学技术基础条件平台建设项目
新疆生物资源与基因工程重点实验室开放基金
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