换一批siRNA沉默STAT3基因对肝癌细胞株HepG2中STAT3及其下游相关基因表达的影响
Effect of silenced STAT3 gene with siRNA on STAT3 gene and its downstream genes in HepG2 cell line
摘要[目的]探讨小分子干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)沉默信号转导与转录活化因3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)基因对肝癌细胞株HepG2生长、凋亡及STAT3与其下游基因表达的影响.[方法]构建STAT3-siRNA,并将其稳定转染到肝癌细胞株HepG2中,建立HepG2/STAT3-siR NA细胞株.MTT比色法检测转染对细胞增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测STAT3基因及其下游细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、存活蛋白(survivin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因mRNA和蛋白表达水平;Hochest33342荧光染色法检测细胞凋亡.[结果]MTT结果显示,转染后HepG2细胞存活率显著降低(t=4.262,P=0.001;t=25.330,P=0.000; t=50.288,P=0.000).RT-PCR和Western blotting结果显示,转染后HepG2细胞STAT3、cyclinD1、survivin、VEGF基因mRNA和蛋白表达水平显著降低(F=770.918,P=0.000;F=940.630,P=0.000;F=723.783,P=0.000;F=582.362,P=0.000)(F=496.363,P=0.000;F=484.556,P=0.000;F=468.469,P=0.000;F=193.845,P=0.000).Hochest33342荧光染色结果显示,转染后细胞凋亡显著增加(F=3311.491,P=0.000).[结论]通过RNA干扰技术沉默STAT3基因可有效下调肝癌细胞HepG2中STAT3基因及cyclinD1、survivin、VEGF基因表达并抑制肝癌细胞存活增加细胞凋亡,STAT3-siRNA有望成为治疗原发性肝癌的新技术.
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