低氧反应元件荧光素酶报告载体的构建及鉴定

Construction and identification of luciferase reporter vector for hypoxia response element

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摘要[目的]构建低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)荧光素酶报告载体,以检测和分析细胞内低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1)表达.[方法]化学合成HRE的核心启动子序列(6×HRE),将其定向克隆入pGL3-BASIC,经PCR、酶切和测序鉴定,获得pGL3-HRE荧光素酶报告载体;然后以pGL3-HRE和β-gal DNA共转染MG63细胞,通过物理和化学低氧来检测其活性,并western blotting分析转染细胞HIF-1表达水平.[结果]获得了pGL3-HRE荧光素酶报告载体,PCR、酶切和测序鉴定均与预期一致;物理低氧(1％O2)和化学低氧(不同浓度CoCl2)均可诱导转染MG63细胞荧光素酶表达水平的升高(P＜0.05),其中以CoCl.(300 μmol/L)组最为显著,western blotting结果也显示CoCl2(300 μmol/L)组HIF-1表达水平更为显著(P＜0.05),与荧光素酶表达趋势一致.[结论]成功构建了HRE荧光素酶报告载体,为进一步研究HIF-1的表达调控作用及筛选抗低氧药物提供了工具.

作者屈野 ^[1] 陈晓 ^[2] 杨静 ^[3] 郭小芹 ^[3] 李玲 ^[4] 王越 ^[1] 学术成果认领

作者单位武警后勤学院病原生物学与免疫学教研室,天津300309;天津市职业与环境危害防制重点实验室,天津300309 ^[1] 武警后勤学院附属医院妇产科,天津,300162 ^[2] 武警后勤学院病原生物学与免疫学教研室,天津,300309 ^[3] 武警后勤学院药理学教研室,天津,300309 ^[4]

关键词低氧诱导因子低氧反应元件荧光素酶报告基因 Hypoxia inducible factor-1 Hypoxic response element Luciferase Reporter gene

分类号 Q74

栏目名称

论著

发布时间 2016-02-24