换一批过表达RIPK3对SH-SY5Y细胞CX3CL1基因表达的影响
Effect of overexressed RIPK3 on the expression of CX3CL1 gene expression in SH-SY5Y
摘要[目的]建立受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)过表达的人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y细胞模型,筛选表达水平受到RIPK3影响的基因,以探讨RIPK3在神经系统中可能具有的生物学效应.[方法]采用分子克隆的方式在实验组SH-SY5Y细胞内上调RIPK3的表达水平.激光共聚焦显微镜下观察GFP蛋白的表达情况确认转染结果;以Western blotting确认RIPK3表达变化.通过MTT实验中细胞增值活性的改变确认外源性RIPK3在细胞内是否具有生物学活性.通过转录组测序技术(RNAseq)从mRNA水平对对照组和实验组基因表达水平的变化进行检测,通过生物医学分析研发软件暨资料库(ingenuity pathway analysis,IPA)对RNAseq数据进行分析,获得重要的下游效应分子及相关信号通路,并对其相关作用分子表达发生的改变进行统计.采用Western blotting对部分实验数据进行验证.[结果]RIPK3表达水平上调后,实验组SH-SY5Y细胞增殖活性受到抑制,IPA分析结果显示:CX3CL1的表达水平出现明显上调;与其相关的部分信号分子也发生了相应的改变.其后Western blotting结果从蛋白水平验证了CX3CL1表达水平的变化.[结论]RIPK3能够在mRNA及蛋白水平上调节CX3CL1表达,并对其相关分子产生影响,进而在神经系统各种生理与病理条件下发挥重要的作用.
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关键词
受体相互作用蛋白激酶-3CX3CL1基因神经母细胞瘤Receptor-interacting protein kinase 3C-X3-C motif ligand 1Shuman neuroblastoma cells
分类号
R393（基础医学）
栏目名称
发布时间
2016-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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