换一批
换一批Pseudomonas putida ND6中两个高度同源catA基因的分离、克隆及比较
Isolation, cloning and comparison of two highly homologous catA genes in Pseudomonas putida ND6
摘要[目的]分别对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)ND6基因组中基因高度同源的儿茶酚1,2-双加氧酶基因catA1、catA2进行克隆和原核表达,并进行生物信息学分析和酶学性质比较.[方法]通过生物信息学软件对catA1和catA2进行序列分析和进化树构建,利用经典的酶切连接方法和核酸外切酶Ⅲ介导的无缝连接两种方法分别对catA1和catA2进行了表达载体的构建,对表达产物的酶学性质(最适反应温度,最适反应pH,耐热性,底物特异性等)进行了研究.[结果]catA1和catA2在基因序列上相似性为73.57％,两个酶的最适反应pH均为7.4,最适反应温度分别为45℃、50℃,Km值分别为1.28、1.66 μmol/L,酶活力单位分别为9.00、8.35 U/mg,两个酶对儿茶酚和4-甲基儿茶酚具有较好的反应活性,在C120分类中属于同一类型.[结论]本研究通过两种方式成功构建了高度同源性两个基因的表达载体,对于分离高同源性基因有一定的参考意义,同时通过对ND6菌株中同工酶的酶学性质进行研究和比较,加深了对ND6萘降解机制的理解,进一步探讨了冗余降解基因存在的意义.
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关键词
恶臭假单胞菌ND6儿茶酚1,2-双加氧酶不依赖连接酶的分子克隆酶学研究Pseudomonas putida ND6Catechol 1,2 dioxygenaseLigation-independent cloningEnzymatic research
分类号
Q753
栏目名称
论著
发布时间
2017-08-02
基金项目
国家自然科学基金资助项目
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