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慢病毒表达载体pLVX-PRDX4的构建及稳定转染HepG2细胞系的建立

Construction of lentiviral expression vector pLVX-PRDX4 and establishment of its stably- transfected HepG2 cell line

摘要[目的]本研究拟构建人源过氧化还原蛋白家族成员(Peroxiredoxin 4,PRDX4)稳定过表达的人肝癌HepG2细胞系,同时验证PRDX4表达.[方法]利用RT-PCR技术扩增人PRDX4基因全长序列,插入pLVX-IRES-Puro载体,构建pLV-PRDX4载体,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,感染HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立稳定过表达PRDX4细胞系,并且采用Western blotting验证PRDX4表达.[结果]Western blotting结果证实过表达HepG2细胞株PRDX4表达量明显高于对照细胞. [结论]成功构建过表达PRDX4的慢病毒载体和HepG2稳定细胞系,为研究PRDX4在肝癌形成和发展中的作用和机制奠定了基础.

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