换一批
换一批苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究
Expression and Insecticidal Activities Analysis of Silent Gene cry2Ab3 form Bacillus thuringiensis C002 Strain
摘要对苏云金芽孢杆菌C002菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT315-2Ab进行亚克隆和序列测定,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3.序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列,但没有功能性启动子,为沉默基因.根据大肠杆菌T7表达载体pET-21b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架(ORF)两端序列,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET-2Ab3.表达质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达.生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性.进一步提取Cry2Ab3蛋白,生测结果表明其对棉铃虫LC50为32.55μg/g.
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分类号
Q939.11
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:0001-6209.2002.05.008
发布时间
2004-01-08
基金项目
国家转基因植物研究和产业化专项基金（J99-A-033）
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