换一批
换一批犬冠状病毒S糖蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及其免疫原性研究
Construction of recombinant Canine adenovirus type 2 expressing Canine coronavirus spike glycoprotein and its immunogenicity
摘要首次构建了能表达犬冠状病毒纤突糖蛋白(CCV S1)的重组犬2型腺病毒(CAV-2).用RT-PCR方法从CCVDXMV株细胞培养物中扩增出编码S糖蛋白A、B、C和D 4个抗原位点的基因片段S1,将其克隆到pVAX1中,然后将含有CCV S1基因的完整表达盒(CMV-S1-PolyA)进一步定向克隆到含有CAV-2 E3区的穿梭质粒pVAXE3中,构建出pVAX△E3S1.通过Sal Ⅰ+Nru Ⅰ双酶切pVAX△E3S1回收含有目的基因的表达盒,将其克隆入含有CAV-2全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,获得重组质粒pCAV-2-CCV-S1.Cla Ⅰ+Asc Ⅰ酶切pCAV-2-CCV-S1释放重组基因组,转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-S1.该重组病毒在MDCK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变.通过mRNA水平和Western blot检测,证实重组病毒能表达CCV S1蛋白.动物免疫试验表明,该重组病毒可以有效地诱导免疫犬产生抗CCV和CAV-2抗体.
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分类号
S85
栏目名称
侵染和免疫
DOI
10.3321/j.issn:0001-6209.2005.04.022
发布时间
2005-09-08
基金项目
国家自然科学基金
军队医药卫生科研项目
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