换一批
换一批大肠杆菌BL21(DE3)中DnaE intein介导ABCA1蛋白的连接
Separate expression of ABCA1 and ligation mediated by Ssp DnaE intein in Escherichia coli BL21 (DE3)
摘要[目的]利用Ssp DnaE intein的蛋白质反式剪接技术研究在大肠杆菌中对ABCAl基因表达产物的连接作用.[方法]将ABC:A1的cDNA于满足剪接所需的保守性氨基酸Cys~(978)密码子前断裂为N端和C端两部分,分别与天然存在的反式作用Ssp DnaE intein的123个氨基酸的N端和36个氨基酸的C端编码序列融合,构建到原核表达载体pET-28a(+).转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞,诱导表达后观察重组蛋白的表达和ABCA1的连接.[结果]转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示预期大小的ABCAl剪接蛋白条带,并进一步为His-Tag抗体进行的Westem blotting证实.[结论]结果表明却DnaE intein可有效催化ABCA1的连接,为进一步研究利用双腺相关病毒(AAV)载体转运ABCAl基因,克服单个AAV载体容量限制进行由ABCA1基因突变所致Tangier病的基因治疗奠定了基础.
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栏目名称
酶和蛋白质
DOI
10.3321/j.issn:0001-6209.2009.12.009
发布时间
2010-01-29
基金项目
山东省自然科学基金
烟台市科技计划项目
教育部留学回国人员科研启动基金
鲁东大学学科建设经费
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