换一批
换一批PEG介导的苹果腐烂病菌原生质体转化
Development of Genetic Transformation system of Valsa mali of apple mediated by PEG
摘要[目的]建立PEG介导的苹果腐烂病菌原生质体遗传转化体系.[方法]本文利用带有hph基因的质粒,以苹果腐烂病菌(Valsa mali var.mali )03-8为受体菌株,通过PEG融合法对其原生体进行转化.[结果]于YEPD内培养48 h的菌丝,在酶解液浓度为50 mg/mL Driselase+10 mg/mL Lysing Enzymes情况下,按10 mL酶液/0.5 g湿菌体比例,酶解2h时可以释放出4×107个/mL原生质体,其转化效率为44个/μg DNA.对转化子的PCR检测和Southern杂交分析表明,hph基因已经整合进苹果树腐烂病菌的基因组中.转化子在PDA培养基中继代5次后,87.5％的转化子仍能正常生长,表明外源基因hph能在苹果树腐烂病菌中稳定遗传.[结论]该转化体系的建立为苹果树腐烂病菌致病相关基因的深入研究奠定了基础.
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