c-di-GMP抑制转录调控因子Clpxoo与葡聚糖酶基因启动子的结合

Binding of transcription regulator Clpxoo to promoter of endoglucanase gene engAxoo was inhibited by c-di-GMP in Xanthomonas oryzae pv.oryzae

摘要[目的]阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体和转录调控因子Clpxoo对葡聚糖酶基因(engAxoo)的转录调控作用机制.[方法]通过基因表达载体的构建和转化、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了clpxoo基因的原核表达和产物纯化.通过荧光素(FAM)探针标记和凝胶阻滞试验(EMSA)对Clpxoo纯化蛋白与葡聚糖酶基因启动子(engAxoo-p)的结合活性及其c-di-GMP信号分子的抑制作用进行了测定分析.[结果]在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo纯化蛋白.Clpxoo可与engAxoo-p序列发生阻滞现象,表明它具有与启动子特异性结合的活性.在反应体系中加入c-di-GMP可导致结合作用的消除.[结论]Clpxoo接受c-di-GMP信号后,可能通过构象的改变,从而与engAxoo-p的结合活性受到抑制；优化的Clpxoo蛋白纯化和EMSA方法可以用于后续的调控元大规模鉴定的研究.

作者李波 ^[1] 田芳 ^[1] 陈华民 ^[1] 吴茂森 ^[1] 何晨阳 ^[1] 学术成果认领

作者单位中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193 ^[1]

关键词水稻白叶枯病菌 c-di-GMP 信号受体蛋白启动子结合作用 Xanthomonas oryzae pv.oryzae cyclic diguanylate signal receptor promoter binding

主题词蛋白(Egg White)基因(Genes)稻属(Oryza)葡聚糖酶(Dextranase)方法(Methods)

分类号 Q933

栏目名称 遗传和分子生物学

发布时间 2013-11-29

基金项目

国家自然科学基金项目 国家"973项目" the National Natural Science Foundation of China by the Key Project of Chinese National Programs for Fundamental Research and Development