鳖源铜绿假单胞菌的分离鉴定及多位点序列与全基因组分析
Identification,multilocus sequence typing and whole-genome analysis of Pseudomonas aeruginosa strains isolated from diseased Trionyx sinensis
摘要[目的]查明引起湖北仙桃某中华鳖养殖场中华鳖发病死亡的病原及其特征.[方法]本研究分离患病中华鳖的病原,并结合形态特征、生理生化试验、16S rRNA基因鉴定,鉴定分离菌株;通过人工回归感染试验、药敏试验、全基因组测序与分析对分离菌株的致病性和耐药性进行研究;通过多位点序列分型(multilocus sequence type,MLST)分析,对分离菌株的流行情况进行探究.[结果]从患病中华鳖肝脏等部分分离到3株优势菌株HX8、FG10和GC20,16S rRNA基因同源性和生化特征分析鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).回归感染试验证实该菌株是引起本次中华鳖患病的病原菌.3株分离株的药敏实验结果基本一致,均对诺氟沙星、恩诺沙星等8种抗生素敏感,对氟苯尼考、多西环素、磺胺异恶唑等6种抗生素耐药.MLST鉴定表明,3株分离株均属于序列型(sequence type,ST)252型,eBURST分析进一步显示ST252型与一些ST共同构成了克隆复合体(clonal complexes,CC)CC252,且ST252是CC252的原始序列型(founder ST).全基因组测序结果显示,FG10的全基因组大小为5.65 Mb,GC含量为65.3%,共预测到5 956个编码序列(CDS),GenBank登录号为JAJGXC000000000.通过与毒力因子数据库(the virulence factor database,VFDB)比对,预测到873个毒力相关因子,主要与黏附、分泌系统以及毒素等相关.通过与耐药基因数据库(the comprehensive antibiotic resistance database,CARD)比对,结果显示 FG10中含有喹诺酮类、碳青霉烯类、肽类等抗生素的耐药相关基因.[结论]本研究分离获得了中华鳖的病原细菌铜绿假单胞菌,MLST分析推测了其流行情况,基因组数据揭示了其毒力及耐药基因,为防控水产养殖中铜绿假单胞菌感染提供了一定的参考依据.
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