摘要[目的 ]Ⅰ型羊毛硫肽通常具有广泛的生物活性,且抑菌机制独特,较少产生耐药性,因而在临床上具有很好的应用前景.本文对Streptomyces coelicolor A3(2)基因组上2个新颖的Ⅰ型羊毛硫肽生物合成基因簇进行研究,以实现目标羊毛硫肽的表达.[方法]首先,通过antiSMASH分析S.coelicolor A3(2)基因组序列,挖掘羊毛硫肽生物合成基因簇,使用BLAST进行基因功能注释,选择可能参与生物合成过程的基因;然后利用基因组装技术构建异源表达质粒,通过接合转移在链霉菌底盘细胞中进行异源表达;最后对发酵产物进行高效液相色谱、质谱及生物活性检测.[结果]通过添加启动子元件重构S.coelicolor A3(2)上基因簇3(8.9 kb)和基因簇24(9.0 kb),得到pYES-ColE1-SCO-cluster3 和 pYES-ColEl-SCO-cluster24.pYES-ColE1-SCO-cluster3 在底盘细胞Streptomyces coelicolor M1152 和 Streptomyces sp.A14 中成功表达,得到潜在目标化合物 coelin 3;pYES-ColE1-SCO-cluster24在底盘细胞Streptomyces sp.ZM13中成功表达,得到潜在目标化合物coelin 24.其中 coelin 3 对 Bacillus subtilis 168 和 Escherichia coli ATCC 25922 具有抑制作用,并且抑菌圈均达到28mm.[结论]本研究成功使用启动子激活和异源表达策略实现了 coelin3和coelin24的表达和活性测试,为后续新颖的羊毛硫肽结构解析和作用机制研究奠定了基础.