换一批特异腐质霉角质酶-OMP25融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达
High-efficiency expression of Humicola insolens cutinase-OMP25 fusion protein in Escherichia coli
摘要[目的]通过探究特异腐质霉角质酶-OMP25融合蛋白(HiC-OMP25)在不同大肠杆菌(Escherichia coli)菌株中的表达情况、底物降解情况、热稳定性及宿主菌细胞膜通透性与细胞表面疏水性,揭示表达HiC-OMP25时不同宿主菌的差异性,并进一步提高HiC-OMP25在大肠杆菌中的表达量.[方法]分别在E.coli BL21(DE3)及E.coli C43(DE3)中表达HiC-OMP25,并测定其对对硝基苯丁酸酯(4-nitrophenol butyrate,pNPB)、聚丙烯酸乙酯(polyethyl acrylate,PEA)的降解效果、50℃稳定性;测定表达HiC-OMP25时宿主菌的细胞膜通透性及细胞表面疏水性变化;共表达伴侣蛋白提高HiC-OMP25在E.coli C43(DE3)中的表达量.[结果]HiC-OMP25在E.coli BL21(DE3)与E.coli C43(DE3)中均成功表达并降解pNPB,但前者对PEA的降解效果及50℃稳定性均低于后者.同时,表达HiC-OMP25显著增强了 E.coli BL21(DE3)的细胞膜通透性及细胞表面疏水性.HiC-OMP25与巯基氧化酶(Ervlp)、二硫键异构酶(DsbC)在E.coli C43(DE3)中共表达时,其表达量为原始菌株的2.14倍,且对pNPB及PEA均有良好的降解效果.[结论]异源表达时,HiC-OMP25在E.coli C43(DE3)中正确折叠,而在E.coli BL21(DE3)中未完全正确折叠;通过共表达伴侣蛋白提高了 HiC-OMP25在E.coliC43(DE3)中的表达量,为以后HiC-OMP25的工业化生产及应用奠定了基础.
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栏目名称
DOI
10.13343/j.cnki.wsxb.20220213
发布时间
2023-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2019YFA0706900）
江苏省科技厅政策引导类计划(国际科技合作/港澳台科技合作)—一带一路创新合作项目（BZ2020010）
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