摘要[目的]研究调控蛋白QsvR对副溶血弧菌Ⅵ型分泌系统 1(type Ⅵ secretion system 1,T6SS1)相关基因的转录调控关系.[方法]提取野生株(wild type,WT)和qsvR突变株(ΔqsvR)的总RNA,采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)研究QsvR对靶基因的调控关系;进而采用引物延伸法定位靶基因的转录起始位点和核心启动子区,并根据引物延伸产物丰度判断QsvR对靶基因的调控关系;将靶基因的调控区DNA序列克隆入pHRP309 质粒中的β-半乳糖苷酶基因上游(LacZ重组质粒),并将重组质粒转化入WT和ΔqsvR中,通过LacZ报告基因融合试验研究 QsvR对靶基因的调控关系;将LacZ重组质粒分别转化入含有 pBAD33 或 pBAD33-qsvR的大肠杆菌 100λ pir中,进一步采用LacZ报告基因融合试验研究在异体宿主中QsvR对靶基因的调控关系;PCR扩增靶基因调控区DNA序列,同时表达并纯化His-QsvR重组蛋白,采用凝胶阻滞试验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)研究His-QsvR对靶基因调控区DNA序列是否具有直接的结合作用.[结果]qPCR结果显示,与WT相比,ΔqsvR中T6SS1 相关基因VP1388(操纵子 VP1388-1390 首基因)和hcp1(操纵子 VP1393-1406 首基因)的转录水平显著性升高,表明QsvR抑制VP1388 和hcp1的转录;引物延伸结果显示VP1388 和hcp1各有一个转录起始位点,分别为C(-64)和T(-62),且它们的转录活性受QsvR的抑制;LacZ报告基因融合试验结果显示QsvR可以抑制副溶血弧菌和EC100λ pir中VP1388 和hcp1的启动子区转录活性;EMSA结果显示His-QsvR对VP1388 和hcp1的启动子区DNA序列具有直接的结合活性.[结论]QsvR对T6SS1相关操纵子VP1388-1390 和VP1393-1406 的转录具有直接的抑制作用.