牛支原体LRR5蛋白原核表达及其在牛支原体入侵宿主细胞过程中的作用分析

Prokaryotic expression of Mycoplasma bovis LRR5 protein involved in the invasion of Mycoplasma bovis into host cells

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摘要致病性支原体具有入侵宿主细胞的能力,这是其发挥致病作用的关键.介导支原体入侵宿主细胞的自身功能蛋白可能是一种潜在的药物或疫苗靶标.[目的]克隆表达牛支原体(Mycoplasma bovis)MBOVPG45_0564基因编码蛋白(命名为LRR5蛋白),并探究其在M.bovis入侵宿主细胞过程中的作用.[方法]利用NCBI数据库对MBOVPG45_0564基因进行同源性分析,用Discovery Studio Client系统对LRR5蛋白进行蛋白结构预测;原核表达LRR5蛋白并制备其小鼠多克隆抗体,利用免疫电镜对LRR5蛋白进行亚细胞定位;通过平板计数、激光共聚焦显微镜观察LRR5抗体封闭后M.bovis对胎牛肺(embryonic bovine lung,EBL)细胞入侵率的变化;将LRR5蛋白偶联至荧光微球表面后,以激光共聚焦显微镜及高内涵活细胞成像系统观察微球进入EBL细胞情况.[结果]MBOVPG45_0564基因在牛支原体属中为保守基因,其编码蛋白LRR5为膜相关蛋白,空间构象呈典型的月牙状,多个重复的亮氨酸基序以超螺旋方式组装并形成螺线管蛋白质结构单元.LRR5抗体封闭后,M.bovis对EBL细胞的入侵率显著降低(P＜0.05),荧光微球偶联LRR5蛋白后,荧光微球可成功进入EBL细胞.[结论]MBOVPG45_0564基因编码的LRR5蛋白定位在M.bovis膜上,在M.bovis入侵宿主细胞过程中发挥着重要作用.

作者冯雅茹 ^[1] 周梦婷 ^[1] 张瑜瑜 ^[1] 张格 ^[1] 高鹏程 ^[2] 冉多良 ^[1] 许健 ^[3] 储岳峰 ^[3] 李斌 ^[1] 学术成果认领

作者单位新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052;新疆草食动物新药研究与创制重点实验室,新疆乌鲁木齐 830052 ^[1] 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000;甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046 ^[2] 新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐 830052;中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000;甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046 ^[3]

关键词牛支原体 MBOVPG45_0564基因入侵蛋白表达生物学功能 Mycoplasma bovis MBOVPG45_0564 invasion protein expression biological function

栏目名称 研究报告

DOI 10.13343/j.cnki.wsxb.20230688

发布时间 2024-11-25