摘要[目的]人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)是全球范围内引起人急性胃肠炎的主要病原之一,目前尚无有效的疫苗对该病毒进行预防.本研究旨在利用flashBAC杆状病毒表达系统,制备HuNoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLP),为研发HuNoV疫苗奠定基础.[方法]将GⅡ.4型HuNoV的VP1蛋白全长基因序列进行密码子优化后合成,克隆至杆状病毒pBacPAK9转移载体,获得pBacPAK9-8his-VP 1重组质粒.酶切、测序鉴定正确后将重组质粒与线性baculovirus plasmid(Bacmid)共转染SF9细胞,获得含有VP1基因的重组杆状病毒.重组杆状病毒感染Hi-Five(HF)细胞进行表达,利用 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和 Western blotting 分析 VP1 蛋白的表达.用镍柱亲和层析方法纯化VP1蛋白;对纯化后的VP1蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting检测.使用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)对纯化的VP1蛋白进行纯度鉴定.利用透射电镜观察VLP.[结果]构建了 pBacPAK9-8his-VP1重组质粒,VP1蛋白在HF细胞中主要在细胞质内表达,分子量约为58kDa.HPLC结果显示VP1蛋白纯度大于99％,透射电镜可以观察到形状规则、大小均一、直径约为30-40 nm的VLP.[结论]利用杆状病毒表达系统制备了 GⅡ.4型HuNoV的VLP,为HuNoV疫苗的研发奠定了基础.