换一批猪流行性腹泻病毒非结构蛋白Nsp8与宿主细胞互作蛋白的筛选与鉴定
Screening and identification of host proteins interacting with Nsp8 of porcine epidemic diarrhea virus
摘要猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起严重腹泻、脱水的肠道病毒,PEDV的广泛流行对生猪养殖产业造成巨大经济损失,目前仍无有效的预防和治疗手段.Nsp8是一种参与PEDV复制的重要非结构蛋白,其存在相互作用的宿主蛋白尚不清楚.[目的]筛选与PEDVNsp8互作宿主蛋白,初步探究互作宿主蛋白对PEDV复制的影响,为寻找PEDV新的关键性治疗靶点提供理论基础.[方法]利用真核表达载体pcDNA3.1(+)成功构建PEDV Nsp8真核表达质粒,通过免疫共沉淀、质谱分析及激光共聚焦等技术筛选能够与其相互作用的宿主蛋白,进一步在LLC-PK细胞中通过过表达、敲低等方法探究互作宿主蛋白对PEDV复制的影响.[结果]质谱检测筛选到Nsp8潜在互作宿主蛋白36个,验证了宿主蛋白热休克蛋白成员8(heat shock protein member 8,HSPA8)与Nsp8相互作用,在LLC-PK细胞中过表达HSPA8能够剂量依赖性抑制Nsp8蛋白过表达,而且在蛋白质和转录水平显著剂量依赖性抑制PEDV复制;干扰内源性HSPA8表达能够显著促进PEDV 复制,TCID50和间接免疫荧光试验检测(indirect immunofluorescent assay,IFA)结果进一步证明了 HSPA8抑制PEDV复制.[结论]本研究筛选出PEDVNsp8的互作宿主蛋白HSPA8,并且证明HSPA8能显著抑制PEDV复制,为设计以HSPA8为靶点的预防或治疗药物提供新思路.
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DOI
10.13343/j.cnki.wsxb.20240237
发布时间
2024-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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