摘要[目的]建立一种双重快速检测方法,旨在快速筛查配方乳粉中克罗诺杆菌、大肠埃希氏菌O157:H7、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单核增生李斯特氏菌等 6 种常见食源性致病菌.[方法]酶促等温扩增(enzymatic recombinase amplification,ERA)技术是一种新型等温扩增技术,能在 25-42℃的条件下,仅需 10-30 min完成对微量DNA或RNA的指数级扩增.基于该技术,本研究设计了针对克罗诺杆菌的ERA检测引物探针,同时筛选适用于ERA检测体系的大肠埃希氏菌O157:H7、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单核增生李斯特氏菌的引物探针,确定了每种单一菌种的ERA检测引物探针.通过引物探针的两两组合分析及方法优化,建立双重ERA检测方法.通过人工模拟污染试验和实际样品检测,确定双重ERA检测方法的检出限和准确性.[结果]建立了 3 组双重ERA法,能够快速检测 6 种食源性致病菌,检测时间仅需 16 min 10 s.灵敏度检测结果显示,克罗诺杆菌和大肠埃希氏菌O157:H7、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌 2 种组合的DNA检测灵敏度均为 1 ng/μL,而沙门氏菌和单核增生李斯特氏菌的 DNA 检测灵敏度为 10-1 ng/μL.人工模拟污染试验显示,该方法能检出的最低菌浓度为1 CFU/mL.在 37 份临期市售配方乳粉中,蜡样芽孢杆菌和单核增生李斯特氏菌的检出率分别为37.84%和 21.62%.与行业标准实时荧光PCR法的检测结果比对,本研究建立的双重ERA检测方法结果一致,证实了其准确性.[结论]本研究建立的双重ERA方法具有较高的特异性和灵敏度,从DNA提取到最终获得检测结果该方法仅需约 20 min,并能同时检测 6 种致病菌,显著提高了检测效率,对食源性致病菌的快速筛查具有重要意义.