换一批基于T6SS毒素Txe1的负筛选系统在杀鱼爱德华氏菌基因组编辑中的应用
Application of a T6SS effector Txe1-based counterselection system for genome editing in Edwardsiella piscicida
摘要以果聚糖蔗糖酶(sucrose-6-fructosyltransferase,SacB)为基础的双交换同源重组技术虽常用于革兰氏阴性菌基因组编辑,但其负筛选效率在不同菌株间常存在显著差异,部分菌株因代谢特性或基因组组成差异导致效率低下.[目的]构建基于VI型分泌系统(T6SS)效应蛋白Txe1 的新型负筛选体系,以提升无痕基因组编辑效率.[方法]改造传统自杀质粒pDM4,引入卡那霉素抗性基因,获得衍生质粒 pDM4K;再以阿拉伯糖诱导型 Txe1 毒素 C 端结构域表达盒(araC-PBAD::txe1CTD)替换质粒中的sacB基因,构建新型负筛选质粒pTL1010.以杀鱼爱德华氏菌FC2 株毒力相关基因tssB为靶点,系统比较Txe1 与SacB系统的负筛选效率.[结果]阿拉伯糖诱导下,Txe1 系统的负筛选效率达 91.1%(假阳性率 8.9%),显著优于传统 SacB 系统(假阳性率100%,P<0.01).[结论]新型Txe1 负筛选质粒pTL1010 显著提高了杀鱼爱德华氏菌的无痕基因编辑效率,为革兰氏阴性菌精准遗传操作提供了高效新工具.
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关键词
负筛选标记VI型分泌系统Txe1毒素双交换同源重组杀鱼爱德华氏菌counterselection markertype VI secretion systemTxe1 toxindouble-crossover homologous recombinationEdwardsiella piscicida
栏目名称
DOI
10.13343/j.cnki.wsxb.20250220
发布时间
2025-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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