A 型肉毒神经毒素理化及生物学特性研究

Physicochemical property and biological characteristics of botulinum neurotoxin type A

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摘要目的：探究A型肉毒神经毒素的理化及生物学特性，为A型肉毒神经毒素制品的研制提供依据。方法采用SDS-PAGE、HPLC测定A型肉毒神经毒素的纯度；采用毛细管凝胶电泳分析其在非还原条件及还原条件下各组分的相对分子质量；采用等电点聚焦电泳测定其等电点；对其N-末端氨基酸序列进行测序，并将测序结果与NCBI blast数据库中A型肉毒梭菌Hall株的氨基酸序列作比对，确证其各组分的成分；对A型肉毒毒素复合物及A型肉毒神经毒素进行口服毒性分析，并对3批A型肉毒神经毒素原液和其半成品进行生物学稳定性研究。结果 A型肉毒神经毒素纯度＞99．00％；非还原条件下其相对分子质量约为152000，N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN，为完整的A型肉毒神经毒素；还原条件下，由相对分子质量约为101000、N-末端氨基酸序列为ALNDLQINVN的重链和相对分子质量约为101000、N-末端氨基酸序列为PFVNKQFNYK的轻链组成；等电点为4．91；口服A型肉毒神经毒素的小鼠LD50为1．50×107 U／kg，是其复合物的7．9倍；3批A型肉毒神经毒素原液在2～8℃放置28 d生物学活性无下降，平均比活性为2．13×108 U／mg，是其复合物的7．1倍；3批半成品在18～26℃放置28 d生物学活性无下降。结论 A型肉毒神经毒素纯度较高，非还原条件下为单链，还原条件下裂解为轻链和重链，其原液及其半成品的生物学稳定性较好。