换一批鲍曼不动杆菌MsrA蛋白原核表达载体的构建、纯化及氧化应激条件下的表达
Construction, purification and expression under oxidative stress for prokaryotic expression vector of acinetobacter baumannii MsrA protein
摘要目的 以鲍曼不动杆菌甲硫氨酸亚砜还原酶A(methionine sulfoxide reductase A, MsrA)构建pET28a-MsrA 并表达、纯化原核表达重组质粒, 观察在氧化应激条件下MsrA的表达水平,为其抗氧化功能的研究提供依据.方法 设计并合成分别带NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点的MsrA引物,用PCR方法扩增MsrA基因,构建pET28a-MsrA重组质粒并转化大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组MsrA蛋白表达,经Ni2+亲和层析分离纯化.利用荧光定量PCR方法,观察在氧化应激条件下MsrA蛋白的表达量.结果 构建了编码MsrA蛋白的重组质粒pET28a-MsrA, SDS-PAGE显示在相对分子质量约22 000处有一明显条带的重组MsrA蛋白,并利用Ni2+亲和层析柱纯化获得纯度较高的MsrA蛋白.氧化应激也可快速诱导MsrA蛋白的表达.结论 成功构建了pET28a-MsrA重组质粒及表达纯化系统,且氧化应激条件下MsrA蛋白表达上调.
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关键词
鲍曼不动杆菌甲硫氨酸亚砜还原酶A原核表达蛋白纯化氧化应激Acinetobacter baumanniiMethionine sulfoxide reductase A(MsrA)Prokaryotic expressionProtein purificationOxidative stress
分类号
R318（医用一般科学）
栏目名称
DOI
10.13309/j.cnki.pmi.2017.01.007
发布时间
2017-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖南省教育厅科学研究项目（15C1257）
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