换一批口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞DNA残留量检测方法的建立及验证
Establishment and validation of a method for detecting residual DNA of Vero cells in oral trivalent reassortant live attenuated rotavirus vaccine
摘要目的 建立口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法,并对该方法进行验证及初步应用.方法 以磁珠法提取口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗Vero细胞的残留DNA,将试剂盒自带的定量参考品进行梯度稀释绘制标准曲线,通过参考品循环阈值和浓度对数值之间的线性关系,对供试品的残留DNA进行定量分析.考察该方法的专属性、准确度、精密度、定量限、线性和范围、耐用性,并使用该方法对不同工艺阶段样品的DNA残留量及片段大小进行分析.结果 CHO细胞DNA参考品对试验无干扰;准确度验证:加标供试品的回收率在 64.3%～134.4%之间;重复性和中间精密度验证样品加标检测值的RSD均<30%;定量限为 0.003 pg/10 μL;参考品的检测范围:0.030～3 000.000 pg/μL;标准曲线的R2均>0.99,斜率在-3.1～-3.8,Vero细胞残留DNA检测试剂盒在冻融第 1 次、冻融第2 次、冻融第3 次后,供试品加标检测值的RSD分别为8.3%、12.3%、11.6%,验证项目的各项参数均符合可接受标准.结论 成功建立了口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗中Vero细胞DNA残留量的检测方法,磁珠法结合荧光定量PCR能够快速、准确地对疫苗生产过程中宿主细胞残留DNA进行准确定量,适用于疫苗不同工艺阶段及成品的质量控制.
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关键词
口服三价重配轮状病毒减毒活疫苗宿主细胞残留DNA磁珠法荧光定量PCROral trivalent reassortant live attenuated rotavirus vaccineResidual host cell DNAMagnetic bead methodFluo-rescentquantitative PCR
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DOI
10.13309/j.cnki.pmi.2025.01.006
发布时间
2025-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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