换一批人纤维蛋白溶酶原层析条件的优化及制备工艺验证
Optimization of human plasminogen chromatography conditions and verification of preparation process
摘要目的 通过测试国产亲和树脂层析和离子交换树脂纯化的载量、优化亲和层析洗脱条件,确定人纤维蛋白溶酶原(human plasminogen,Pg)的制备工艺.方法 样品上样于层析柱,洗涤过程中以不同的时间点收集流穿液,检测收集样品中Pg的含量,直至检测到目标蛋白Pg为止,停止上样并进行洗脱.洗脱采用梯度洗脱的方式进行,根据洗脱峰的变化趋势收集即时样品检测目标蛋白Pg的含量,分析结果找到洗脱缓冲液中最适的ε-氨基己酸(ε-aminocaproic acid,EACA)的洗脱浓度.用优化后的条件进行初步工艺放大制备目标蛋白Pg,检测关键步骤Pg蛋白含量和效价,并检测起始原料和原液其他蛋白的含量,计算Pg蛋白含量步骤回收率、Pg及其他蛋白的占比和关键步骤Pg的比活,与原工艺条件纯化结果进行对标.结果 亲和树脂纯化Pg载量>3.00 g/L,洗脱液EACA的含量优化后浓度降低到原缓冲液浓度的 30%,减少了制品中EACA的残留.离子交换树脂载量在 10.00～15.00 g/L.利用优化后的条件进行放大规模层析纯化,目标蛋白Pg总回收率略高于对标批次,目标蛋白Pg占比从0.19%上升至99.04%,起始原料中目标蛋白比活<0.020 IU/mg,亲和层析捕获后目标蛋白比活>6.000 IU/mg,阳离子交换层析收集的目标蛋白比活>5.000 IU/mg.结论 优化后的制备工艺采用选定的国产树脂纯化制备Pg制品,可以获得与对标批质量相当的Pg制品.
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关键词
亲和层析离子交换层析上样载量纯化人纤维蛋白溶酶原ε-氨基己酸树脂国产化蛋白回收率比活Affinity chromatographyIon exchange chromatographyLoading capacityPurificationHuman plasminogenε-aminocaproic acid(EACA)ResinLocalizationRecovery yieldSpecific activity
分类号
R973+1（药品）
栏目名称
DOI
10.13309/j.cnki.pmi.2025.02.008
发布时间
2025-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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