换一批
换一批重金属污染土壤总DNA提取方法的研究——土壤预处理和硫酸铵铝在DNA提取中的应用
Application of soil pretreatments and AlNH4(SO4)2 in DNA extraction from soils contaminated with heavy metals
摘要[目的]从土壤中获得高纯度、高得率和完整性好的总DNA,为重金属污染土壤微生物群落多样性的分析奠定基础.[方法]将一定浓度的硫酸铵铝增补入DNA提取液中,分别联合不同方式的土壤预处理,对所提取的土壤总DNA进行完整性、纯度和得率分析.[结果]TENP-AlNH4(SO4)2法、ABG-AlNH4(SO4)2法、Wash-AlNH4(SO4)2法和试剂盒4种提取方法获得的DNA片段均在23 kb左右,总DNA完整;Wash-AlNH4(SO4)2法提取的DNA纯度较高,A260/A230达到2.00,A260/A280达到1.62; ABG-AlNH4(SO4)2法的DNA得率最高,达到1 010 μg/g土壤;这两种方法提取的DNA在纯度和浓度上均达到后续PCR等分子实验要求.通过扩增提取的土壤总DNA中16S rRNA基因,表明合适浓度的硫酸铵铝能有效去除土壤中的PCR干扰因子.[结论]本研究将土壤的预处理和一定浓度的硫酸铵铝联合使用,获得理想的重金属污染土壤的总DNA.
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栏目名称
生物实验室
DOI
10.13344/j.microbiol.china.130088
发布时间
2014-03-17
基金项目
国家环保公益性行业科研专项项目
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