换一批摘要主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术.本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性一退火一延伸一连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP).原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除.筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变.利用这种方法构建了一个木聚糖酶基因和一个纤维素酶基因的随机突变文库,并筛选出具有正向突变的蛋白,证明以PPCP为基础的原位易错PCR技术,为基因定向进化提供了一种快速有效的随机突变文库构建的新方法.
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关键词
定向进化随机突变文库原位易错PCR环状质粒扩增(PPCP)Directed evolutionConstruction of random mutagenesis librariesIn situ error-prone PCRPCR production of circular plasmid (PPCP)
栏目名称
DOI
10.13344/j.microbiol.china.130243
发布时间
2014-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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