免培养法对大鲵肠道微生物多样性的研究
Culture-independent analysis of intestinal microbial diversity from Chinese giant salamander
摘要[目的]了解大鲵肠道内生细菌的组成及多样性.[方法]采用美国Mo Bio公司试剂盒提取大鲵肠道内容物总DNA,选用细菌通用引物799F和1492R对总DNA进行16S rRNA基因特异性扩增,构建大鲵肠道内容物内生细菌16S rRNA基因克隆文库,对阳性克隆进行限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,并对Hae Ⅲ酶切带谱不同的菌液进行测序,构建系统发育树.[结果]根据酶切带谱分析和测序结果的不同,将随机挑取的101个阳性克隆归为28个不同的可操作分类单元(OTUs),系统发育分析表明这些克隆序列分别属于变形菌门(Proteobacteria)、梭菌门(Clostridia)、芽孢杆菌门(Bacilli)和衣原体门(Chlamydiae)4个门.其中,变形菌门(Proteobacteria,占克隆总数的92.08%)为最优势类群.序列比对结果表明这些克隆序列分别与已报道的20个属具有较高的相似性.此外,还有一个OTU在系统发育树上形成独立分支且未能确定其分类.[结论]大鲵肠道内生细菌多样性丰富,并且可能存在新的分类单元.
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